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Javier Fidalgo, * Pierre-Antoine Deglesne, * Rodrigo Arroyo, * Lilian Sepúlveda, * Evgeniya Ranneva, Philippe Deprez Dipartimentu di Scienze, Skin Tech Pharma Group, Castello D'Empúries, Catalogna, Spagna * Questi autori anu alcune idee nantu à stu travagliu Equal sfondate di cuntribuzione: L'acidu ialuronicu (HA) hè un polisaccaridu naturali utilizatu in a produzzione di filler dermali per scopi estetici.Siccomu hà una mità di a vita di parechji ghjorni in i tessuti umani, i filler dermali basati in HA sò mudificate chimicamente per allargà a so vita in u corpu.A mudificazione più cumuna in i fillers basati in HA cummirciali hè l'usu di 1,4-butanediol diglycidyl etere (BDDE) cum'è un agente di reticulazione per reticulà e catene HA.U BDDE residuale o senza reazione hè cunsideratu micca tossicu à <2 parte per milione (ppm);dunque, u BDDE residuale in u filler dermal finale deve esse quantificatu per assicurà a sicurità di i pazienti.Materiali è metudi: Stu studiu descrive a rilevazione è a carattarizazione di un subproduttu di a reazione di reticulazione trà BDDE è HA in cundizioni alkaline cumminendu cromatografia liquida è spettrometria di massa (LC-MS).Risultati: Dopu diverse analisi, hè statu trovu chì e cundizioni alkaline è a temperatura alta utilizata per disinfettà l'idrogelu HA-BDDE prumove a furmazione di stu novu subproduttu, u compostu "propylene glycol-like".L'analisi LC-MS hà cunfirmatu chì u sottoprodottu hà a stessa massa monoisotopica cum'è BDDE, un tempu di ritenzione differente (tR), è un modu di assorbanza UV differente (λ = 200 nm).A cuntrariu di BDDE, hè statu osservatu in l'analisi LC-MS chì in e stesse cundizioni di misurazione, stu subproduttu hà una rata di deteczione più altu à 200 nm.Conclusioni: Questi risultati indicanu chì ùn ci hè micca epossidu in a struttura di stu novu compostu.A discussione hè aperta per valutà u risicu di stu novu subproduttu truvatu in a produzzione di l'idrogelu HA-BDDE (filler dermal HA) per scopi cummirciali.Parole chjave: acidu ialuronicu, filler dermal HA, àcitu ialuronicu cross-linked, BDDE, analisi LC-MS, sottoproduttu BDDE.
I fillers basati in l'acidu hyaluronicu (HA) sò i filler dermali più cumuni è populari utilizati per scopi cusmetichi.1 Stu filler dermal hè un hydrogel, generalmente cumpostu da> 95% acqua è 0,5-3% HA, chì li dà una struttura simile à un gel.2 HA hè un polisaccharide è u cumpunente principale di a matrice extracellulare di i vertebrati.Unu di l'ingredienti.Hè custituitu da l'acidu (1,4)-glucuronicu-β (1,3)-N-acetylglucosamine (GlcNAc) unità di disaccharidi ripetuti cunnessi da ligami glycosidic.Stu mudellu di disaccharide hè u listessu in tutti l'organisimi.In cunfrontu cù certi filler basati nantu à a proteina (cum'è u collagene), sta pruprietà face HA una molécula altamente biocompatibile.Questi filler ponu esibisce specificità di sequenza di aminoacidi chì ponu esse ricunnisciuti da u sistema immune di u paci.
Quandu s'utilice cum'è un filler dermal, a limitazione principale di HA hè u so rapidu turnover in i tessuti per a presenza di una famiglia specifica di enzimi chjamati hyaluronidases.Finu a ora, parechje mudificazioni chimichi in a struttura di HA sò state descritte per aumentà a mità di a vita di HA in tissuti.3 A maiò parte di sti mudificazioni tentanu di riduce l'accessu di l'hyaluronidase à i polimeri di polisaccharide per cross-linking catene HA.Dunque, per via di a furmazione di ponti è di i ligami covalenti intermoleculari trà a struttura HA è l'agente di reticulazione, l'idrogelu HA reticulatu produce più prudutti di degradazione anti-enzima chì l'HA naturali.4-6
Finu a ora, l'agenti di reticulazione chimica utilizati per pruduce HA reticulatu include metacrilamide, 7 hydrazide, 8 carbodiimide, 9 divinyl sulfone, 1,4-butanediol diglycidyl etere (BDDE) è poly(ethylene glycol) diglycidyl etere.10,11 BDDE hè attualmente l'agente di reticulazione più cumunimenti utilizatu.Ancu se questi tipi di idrogeli sò stati pruvati per esse sicuri per decennii, l'agenti di reticulazione utilizati sò reagenti reattivi chì ponu esse citotossichi è, in certi casi, mutageni.12 Dunque, u so cuntenutu residuale in l'idrogel finali deve esse altu.BDDE hè cunsideratu sicuru quandu a cuncentrazione residuale hè menu di 2 parte per milione (ppm).4
Ci sò parechji metudi per detectà a cuncentrazione di BDDE à pocu residuu, u gradu di cross-linking è a pusizione di sostituzione in l'idrogeli HA, cum'è a gascromatografia, a cromatografia di esclusione di taglia accumpagnata da spettrometria di massa (MS), metudi di misurazione di fluorescenza di risonanza magnetica nucleare (NMR), è Array di diodi accoppiata cromatografia liquida d'alta prestazione (HPLC).13-17 Stu studiu descrive a rilevazione è a carattarizazione di un subproduttu in l'idrogelu HA cross-linked finali pruduttu da a reazione di BDDE è HA in cundizioni alkaline.HPLC è cromatografia liquida-spettrometria di massa (analisi LC-MS).Siccomu a toxicità di stu subproduttu di BDDE hè scunnisciuta, ricumandemu chì a so quantificazione di residui deve esse determinata in una manera simile à u metudu generalmente realizatu nantu à BDDE in u pruduttu finali.
U sali di sodiu ottenutu di HA (Shiseido Co., Ltd., Tokyo, Japan) hà un pesu moleculare di ~ 1.368.000 Da (metudu Laurent) 18 è una viscosità intrinseca di 2,20 m3 / kg.Per a reazione di reticulazione, BDDE (≥95%) hè stata acquistata da Sigma-Aldrich Co. (St. Louis, MO, USA).Salina tamponata di fosfatatu cù pH 7,4 hè stata acquistata da Sigma-Aldrich Company.Tutti i solventi, l'acetonitrile è l'acqua utilizati in l'analisi LC-MS sò stati acquistati da qualità di qualità HPLC.L'acidu formicu (98%) hè acquistatu cum'è gradu di reattivu.
Tutti l'esperimenti sò stati realizati nantu à un sistema UPLC Acquity (Waters, Milford, MA, USA) è cunnessi à un spettrometru di massa triple quadrupole API 3000 equipatu cù una fonte di ionizazione elettrospray (AB SCIEX, Framingham, MA, USA).
A sintesi di l'idrogeli HA cross-linked hè stata cuminciata aghjustendu 198 mg di BDDE à una suluzione 10% (w / w) di sodium hyaluronate (NaHA) in presenza di 1% alkali (idrossidu di sodiu, NaOH).A concentrazione finale di BDDE in a mistura di reazione era 9,9 mg/mL (0,049 mM).Allora, a mistura di reazzione hè stata mischjata bè è homogenizata è lasciata prucede à 45 ° C per 4 ore.19 U pH di a reazione hè mantinutu à ~ 12.
Dopu, a mistura di reazzione hè stata lavata cù l'acqua, è l'idrogelu finale HA-BDDE hè stata filtrata è diluita cù tampone PBS per ottene una concentrazione di HA da 10 à 25 mg/mL, è un pH finale di 7,4.Per sterilizà l'idrogeli HA reticulati prudutti, tutti questi idrogeli sò autoclavati (120 ° C per 20 minuti).L'idrogelu BDDE-HA purificatu hè almacenatu à 4 ° C finu à l'analisi.
Per analizà u BDDE presente in u pruduttu HA reticulatu, un campionu di 240 mg hè statu pesatu è introduttu in u foru centrale (Microcon®; Merck Millipore, Billerica, MA, USA; volume 0,5 mL) è centrifugatu à 10.000 rpm à a temperatura di l'ambienti. 10 minuti.Un totale di 20 µL di liquidu pull-down hè statu cullatu è analizatu.
Per analizà u standard BDDE (Sigma-Aldrich Co) in cundizioni alkaline (1%, 0,1% è 0,01% NaOH), se i seguenti cundizioni sò scontri, a mostra di liquidu hè 1:10, 1:100, o finu à. 1: 1 000 000 Se necessariu, utilizate l'acqua deionizzata MilliQ per l'analisi.
Per i materiali di partenza utilizati in a reazione di cross-linking (HA 2%, H2O, 1% NaOH, è 0.049 mM BDDE), 1 mL di ogni mostra preparata da questi materiali hè stata analizata cù e stesse cundizioni di analisi.
Per determinà a specificità di i picchi chì appariscenu in a mappa di ioni, 10 µL di 100 ppb di soluzione standard BDDE (Sigma-Aldrich Co) sò stati aghjuntu à u campione di 20 µL.In questu casu, a cuncentrazione finale di u standard in ogni mostra hè 37 ppb.
Prima, preparate una soluzione di stock BDDE cun una cuncentrazione di 11 000 mg / L (11 000 ppm) diluting 10 μL di BDDE standard (Sigma-Aldrich Co) cù 990 μL MilliQ acqua (densità 1,1 g / mL).Aduprà sta suluzione per preparà una soluzione BDDE 110 µg/L (110 ppb) cum'è una diluzione standard intermedia.Allora, aduprate u diluente standard BDDE intermediu (110 ppb) per preparà a curva standard dilutendu u diluente intermediu parechje volte per ottene a cuncentrazione desiderata di 75, 50, 25, 10 è 1 ppb.Comu mostra in a Figura 1, si trova chì a curva standard BDDE da 1,1 à 110 ppb hà una bona linearità (R2> 0,99).A curva standard hè stata ripetuta in quattru esperimenti indipendenti.
Figura 1 Curva di calibrazione standard BDDE ottenuta da l'analisi LC-MS, in quale una bona correlazione hè osservata (R2> 0.99).
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa.
Per identificà è quantificà i normi BDDE presenti in l'HA cross-linked è i normi BDDE in a suluzione di basa, l'analisi LC-MS hè stata utilizata.
A separazione cromatografica hè stata ottenuta nantu à una colonna LUNA 2,5 µm C18(2)-HST (50 × 2,0 mm2; Phenomenex, Torrance, CA, USA) è mantenuta à a temperatura di l'ambienti (25 ° C) durante l'analisi.A fase mobile hè custituita da acetonitrile (solvent A) è acqua (solvent B) chì cuntene 0,1% àcitu formicu.A fase mobile hè eluita da l'eluzione gradiente.U gradiente hè cusì: 0 minuti, 2% A;1 minutu, 2% A;6 minuti, 98% A;7 minuti, 98% A;7,1 minuti, 2% A;10 minuti, 2% A. U tempu di corsa hè di 10 minuti è u voluminu di iniezione hè 20 µL.U tempu di retenzioni di BDDE hè di circa 3,48 minuti (da 3,43 à 4,14 minuti basatu annantu à l'esperimenti).A fase mobile hè stata pompata à un flussu di 0,25 mL / min per l'analisi LC-MS.
Per l'analisi BDDE è a quantificazione per MS, u sistema UPLC (Waters) hè cumminatu cù un spettrometru di massa triple quadrupole API 3000 (AB SCIEX) equipatu di una fonte di ionizazione elettrospray, è l'analisi hè realizatu in modu di ioni pusitivi (ESI +).
Sicondu l'analisi di frammenti di ioni realizatu nantu à BDDE, u frammentu cù a più intensità hè stata determinata per esse u frammentu chì currisponde à 129.1 Da (Figura 6).Dunque, in u modu di surviglianza multi-ioni (MIM) per a quantificazione, a cunversione di massa (rapportu massa à carica [m/z]) di BDDE hè 203,3/129,1 Da.Utilizeghja ancu u modu di scansione completa (FS) è u modu di scansione di ioni di produttu (PIS) per l'analisi LC-MS.
Per verificà a specificità di u metudu, una mostra in biancu (fase mobile iniziale) hè stata analizata.Nisun signalu hè statu rilevatu in a mostra in biancu cù una cunversione di massa di 203.3 / 129.1 Da.Riguardu à a ripetibilità di l'esperimentu, 10 injections standard di 55 ppb (in u mità di a curva di calibrazione) sò stati analizati, risultatu in una deviazione standard residuale (RSD) <5% (dati micca mostrati).
U cuntenutu residuale di BDDE hè statu quantificatu in ottu diversi idrogeli HA reticulati BDDE autoclavati, chì currispondenu à quattru esperimenti indipendenti.Cum'è discrittu in a sezione "Materiali è Metodi", a quantificazione hè evaluata da u valore mediu di a curva di regressione di a diluzione standard BDDE, chì currisponde à u piccu unicu rilevatu à a transizione di massa BDDE di 203.3/129.1 Da, cù una retenzioni. tempu di 3.43 à 4.14 minuti Ùn aspittà.A Figura 2 mostra un cromatogramma di esempiu di u standard di riferimentu BDDE 10 ppb.A Tabella 1 riassume u cuntenutu residuale di BDDE di ottu idrogels differenti.A gamma di valori hè da 1 à 2,46 ppb.Dunque, a cuncentrazione residuale di BDDE in a mostra hè accettata per l'usu umanu (<2 ppm).
Figura 2 Cromatogramma di ioni di 10 ppb BDDE standard di riferenza (Sigma-Aldrich Co), transizione MS (m / z) ottenuta da l'analisi LC-MS di 203.30 / 129.10 Da (in modu MRM pusitivu).
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple;MS, massa;m/z, rapportu massa à carica.
Nota: I campioni 1-8 sò idrogeli HA reticulati BDDE autoclavati.A quantità residuale di BDDE in l'idrogelu è u piccu di u tempu di ritenzione di BDDE sò ancu signalati.Infine, l'esistenza di novi cimi cù tempi di retenzioni diffirenti hè ancu informatu.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;HA, àcitu hyaluronicu;MRM, monitoraghju di reazioni multiple;tR, tempu di ritenzione;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;RRT, tempu di ritenzione relative.
Sorprendentemente, l'analisi di u cromatogramma di ioni LC-MS hà dimustratu chì basatu annantu à tutti i campioni di l'idrogel HA incrociati autoclavati analizzati, ci era un piccu extra à u tempu di ritenzione più brevi di 2,73 à 3,29 minuti.Per esempiu, a Figura 3 mostra u cromatogramma di ioni di una mostra di HA incruciata, induve un piccu supplementu appare à un tempu di ritenzione diversu di circa 2,71 minuti.U tempu di ritenzione relative osservatu (RRT) trà u piccu novu osservatu è u piccu da BDDE hè statu trovu 0.79 (Table 1).Siccomu sapemu chì u piccu novu osservatu hè menu ritenutu in a colonna C18 utilizata in l'analisi LC-MS, u novu piccu pò currisponde à un compostu più polare chì BDDE.
Figura 3 Ion chromatogram of cross-linked HA hydrogel sample ottenutu da LC-MS (conversione di massa MRM 203.3 / 129.0 Da).
Abbreviazioni: HA, àcitu hyaluronicu;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple;RRT, tempu di ritenzione relative;tR, tempu di ritenzione.
Per escludiri a pussibilità chì i novi cimi osservati ponu esse contaminanti originariamente presenti in a materia prima utilizata, queste materie prime sò ancu analizate cù u stessu metudu di analisi LC-MS.I materiali di partenza analizati includenu acqua, 2% NaHA in acqua, 1% NaOH in acqua, è BDDE à a listessa cuncentrazione utilizata in a reazione di reticulazione.U cromatogramma di ioni di u materiale di partenza utilizatu ùn hà micca mostratu alcun cumpostu o piccu, è u so tempu di retenzioni currisponde à u novu piccu osservatu.Stu fattu sguassate l'idea chì micca solu u materiale di partenza pò cuntene qualsiasi cumposti o sustanzi chì ponu interferiscenu cù a prucedura di analisi, ma ùn ci hè micca un signu di cuntaminazione cruciata cù altri prudutti di laboratori.I valori di cuncentrazione ottenuti dopu l'analisi LC-MS di BDDE è novi picchi sò mostrati in a Tabella 2 (esempii 1-4) è u cromatogramma di ioni in Figura 4.
Nota: I campioni 1-4 currispondenu à a materia prima utilizata per pruduce l'idrogeli HA reticulati BDDE autoclavati.Questi campioni ùn sò micca stati autoclavati.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;HA, àcitu hyaluronicu;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple.
A Figura 4 currisponde à u cromatogramma LC-MS di una mostra di a materia prima utilizata in a reazione di reticulazione di HA è BDDE.
Nota: Tutti questi sò misurati à a listessa cuncentrazione è rapportu utilizata per realizà a reazione cross-linking.I numeri per a materia prima analizata da u cromatogramma currispondenu à: (1) acqua, (2) 2% HA aqueous solution, (3) 1% NaOH aqueous solution.L'analisi LC-MS hè realizata per a cunversione di massa di 203.30/129.10 Da (in modu MRM pusitivu).
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;HA, àcitu hyaluronicu;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple.
E cundizioni chì anu purtatu à a furmazione di novi cimi sò stati studiati.Per studià cumu e cundizioni di reazione aduprate per pruduce l'idrogelu HA reticulatu affettanu a reattività di l'agenti di reticulazione BDDE, chì portanu à a furmazione di novi picchi (possibili sottoprodotti), diverse misure sò state realizate.In queste determinazioni, avemu studiatu è analizatu u crosslinker BDDE finali, chì hè statu trattatu cù diverse concentrazioni di NaOH (0%, 1%, 0,1%, è 0,01%) in un mediu aqueous, seguitu da o senza autoclaving.A prucedura di bacteria per simulà e stesse cundizioni hè u listessu cum'è u metudu utilizatu per pruduce l'idrogelu HA cross-linked.Cum'è discrittu in a sezione "Materiali è Metodi", a transizione di massa di a mostra hè stata analizata da LC-MS à 203.30 / 129.10 Da.U BDDE è a cuncentrazione di u novu piccu sò calculati, è i risultati sò indicati in a Tabella 3. Nisun picchi novi sò stati rilevati in i campioni chì ùn sò micca stati autoclavati, indipendentemente da a presenza di NaOH in a suluzione (mostri 1-4, Table). 3).Per i campioni autoclavati, i novi picchi sò rilevati solu in a presenza di NaOH in a suluzione, è a furmazione di u piccu pare dipende da a cuncentrazione di NaOH in a suluzione (mostri 5-8, Table 3) (RRT = 0.79).A Figura 5 mostra un esempiu di un cromatogramma di ioni, chì mostra dui campioni autoclavati in presenza o assenza di NAOH.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple.
Nota: U cromatogramma superiore: A mostra hè stata trattata cù una soluzione acquosa NaOH 0.1% è autoclavata (120 ° C per 20 minuti).Cromatogramma di fondu: A mostra ùn hè micca trattata cù NaOH, ma autoclavata in i stessi cundizioni.A cunversione di massa di 203.30 / 129.10 Da (in modu MRM pusitivu) hè stata analizata da LC-MS.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple.
In tutti i campioni autoclavati, cù o senza NaOH, a cuncentrazione di BDDE hè stata ridutta assai (finu à 16,6 volte) (esempii 5-8, Table 2).A diminuzione di a cuncentrazione di BDDE pò esse duvuta à u fattu chì à l'alte temperature, l'acqua pò esse una basa (nucleophile) per apre l'anellu epossidu di BDDE per furmà un compostu 1,2-diol.A qualità monoisotopica di stu compostu hè sfarente di quella di BDDE è per quessa ùn serà micca affettata.LC-MS hà rilevatu un cambiamentu di massa di 203.30/129.10 Da.
Infine, sti esperimenti mostranu chì a generazione di novi picchi dipende da a prisenza di BDDE, NAOH, è u prucessu di autoclaving, ma ùn hà nunda di fà cù HA.
U novu piccu trovu à un tempu di retenzioni di circa 2.71 minuti hè stata carattarizatu da LC-MS.Per questu scopu, BDDE (9,9 mg / mL) hè stata incubata in una soluzione acquosa NaOH 1% è autoclavata.In a Tabella 4, e caratteristiche di u novu piccu sò paragunati cù u piccu di riferimentu BDDE cunnisciutu (tempu di ritenzione circa 3,47 minuti).Basatu nantu à l'analisi di frammentazione di ioni di i dui cimi, pò esse cunclusu chì u piccu cù un tempu di ritenzione di 2,72 minuti mostra i stessi frammenti cum'è u piccu BDDE, ma cù intensità differenti (Figura 6).Per u piccu chì currisponde à u tempu di ritenzione (PIS) di 2,72 minuti, un piccu più intensu hè statu osservatu dopu a frammentazione à una massa di 147 Da.À a cuncentrazione di BDDE (9,9 mg / mL) utilizata in questa determinazione, diversi modi di assorbanza (UV, λ = 200 nm) in u spettru ultraviole sò stati ancu osservati dopu a separazione cromatografica (Figura 7).U piccu cù un tempu di retenzioni di 2,71 minuti hè sempre visibile à 200 nm, mentre chì u piccu BDDE ùn pò esse osservatu in u cromatogramma in i stessi cundizioni.
Tabella 4 I risultati di caratterizazioni di u novu piccu cù un tempu di retenzioni di circa 2,71 minuti è u piccu BDDE cù un tempu di retenzioni di 3,47 minuti
Nota: Per ottene questi risultati, l'analisi LC-MS è HPLC (MRM è PIS) sò state realizate nantu à i dui picchi.Per l'analisi HPLC, a rilevazione UV cù una lunghezza d'onda di 200 nm hè usata.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;HPLC, cromatografia liquida d'alta prestazione;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple;m/z, rapportu massa à carica;PIS, prodottu scanning Ion;luce ultravioletta, luce ultravioletta.
Nota: I frammenti di massa sò ottenuti da l'analisi LC-MS (PIS).Cromatogramma superiore: spettru di massa di frammenti di mostra standard BDDE.Cromatogramma di fondu: U spettru di massa di u novu piccu rilevatu (RRT assuciatu cù u piccu BDDE hè 0.79).BDDE hè stata trasfurmata in una soluzione NaOH 1% è autoclavata.
Abbreviazioni: BDDE, 1,4-butanediol diglycidyl etere;LC-MS, cromatografia liquida è spettrometria di massa;MRM, monitoraghju di reazioni multiple;PIS, scanning ionu di produttu;RRT, tempu di ritenzione relative.
Figura 7 Ion chromatogram of the 203.30 Da precursor ion, è (A) u novu piccu cù un tempu di ritenzione di 2.71 minuti è (B) a rilevazione UV di u piccu standard di riferimentu BDDE à 3.46 minuti à 200 nm.
In tutti l'idrogeli HA incruciati pruduciuti, hè statu osservatu chì a concentrazione di BDDE residuale dopu a quantificazione LC-MS era <2 ppm, ma un novu piccu scunnisciutu apparsu in l'analisi.Stu novu piccu ùn currisponde à u pruduttu standard BDDE.U pruduttu standard BDDE hà ancu sottumessu a listessa cunversione di qualità (cunversione MRM 203.30/129.10 Da) analisi in u modu MRM pusitivu.In generale, altri metudi analitici cum'è a cromatografia sò usati cum'è testi limite per detectà BDDE in hydrogels, ma u limitu massimu di rilevazione (LOD) hè pocu più bassu di 2 ppm.Per d 'altra banda, finu à avà, NMR è MS sò stati utilizati per caratterizà u gradu di reticulazione è / o mudificazione di HA in i frammenti di unità di zuccaru di prudutti HA reticulati.U scopu di sti tecnichi ùn hè mai statu di quantificà a deteczione di BDDE residuale à cuncentrazioni cusì bassu cum'è avemu descrittu in questu articulu (LOD di u nostru metudu LC-MS = 10 ppb).
Tempu di post: 01-09-2021